我們在使用細(xì)胞轉(zhuǎn)瓶時(shí)都是將其固定在支加上,傾斜度為5°~10°左右,或?qū)⑥D(zhuǎn)瓶放在一排排轉(zhuǎn)軸之間,使轉(zhuǎn)瓶隨著轉(zhuǎn)軸以每小時(shí)6~12 轉(zhuǎn)緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)。
細(xì)胞貼附于細(xì)胞轉(zhuǎn)瓶壁四周,細(xì)胞貼壁和生長只有一個(gè)表面面積,經(jīng)轉(zhuǎn)動(dòng)一方面使培養(yǎng)液流動(dòng),利于細(xì)胞吸收營養(yǎng)和進(jìn)行代謝,一方面使細(xì)胞有機(jī)會(huì)接觸氣體,有利于細(xì)胞呼吸和發(fā)生氧化還原作用,有利于細(xì)胞生長繁殖。
細(xì)胞轉(zhuǎn)瓶內(nèi)保持有相當(dāng)大的上方空間,以維持合適的氧和pH 水平,通過轉(zhuǎn)動(dòng)可使細(xì)胞交替接觸培養(yǎng)液和空氣,營養(yǎng)可被充分利用。若需增加細(xì)胞產(chǎn)量,除可在增加轉(zhuǎn)瓶的數(shù)量和容積外,使瓶直徑盡可能小,此時(shí)表面面積可因直徑或長度的倍增而成倍增加。
轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)也可使用灌注培養(yǎng)系統(tǒng),因此系統(tǒng)需要錯(cuò)綜復(fù)雜回旋的可連續(xù)供應(yīng)的管道進(jìn)入瓶內(nèi),這是一種昂貴的選擇。
我們在使用細(xì)胞轉(zhuǎn)瓶時(shí)可按照以下操作步驟:加入適量生產(chǎn)培養(yǎng)液于轉(zhuǎn)瓶中。加入所培養(yǎng)的細(xì)胞。在37℃下,以12轉(zhuǎn)/小時(shí),轉(zhuǎn)動(dòng)2小時(shí),使細(xì)胞均勻貼壁。減少轉(zhuǎn)動(dòng)速度至5 轉(zhuǎn)/小時(shí)并連續(xù)培養(yǎng)。在倒置顯微鏡下使用長焦距物鏡檢查細(xì)胞。在細(xì)胞生長至明顯匯合時(shí)(5~6天),移出培養(yǎng)液,加入0.25%胰蛋白酶,并滾動(dòng)轉(zhuǎn)瓶以收獲細(xì)胞。洗去胰蛋白酶,加入新鮮培養(yǎng)基,可轉(zhuǎn)入擴(kuò)大再培養(yǎng)。為了增加表面積,有人將轉(zhuǎn)瓶表面制成帶皺紋的表面或插入多層隔板。以增加表面積。當(dāng)然這是其中一種的培養(yǎng)方式,我們科研者在使用細(xì)胞轉(zhuǎn)瓶來培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)也需要根據(jù)自身培養(yǎng)細(xì)胞來調(diào)整。