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我們在使用細(xì)胞培養(yǎng)瓶培養(yǎng)時由于RAW 264.7細(xì)胞可以作為很多基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域和藥理學(xué)領(lǐng)域的研究模型，所以每個人的研究方向不同，所以細(xì)胞培養(yǎng)方式也有差別，今天富道細(xì)胞來跟大家說一下我們對該細(xì)胞的一些小心得。

由于該細(xì)胞生長快，條件好時24h內(nèi)能分裂兩次至少。而且喜歡扎堆，所以2天就要傳代，不是真的空間不夠，而是細(xì)胞都擠在一起。所以，如果細(xì)胞培養(yǎng)瓶里細(xì)胞密度小，培養(yǎng)基2天還是很好，可是細(xì)胞卻扎堆，需要進行傳代了，就會造成培養(yǎng)基的浪費，所有我們可以保持瓶中的細(xì)胞密度在20~40%左右，分裂2~3次就傳代，這時剛好培養(yǎng)基發(fā)黃。細(xì)胞太少就浪費培養(yǎng)基了。

這個細(xì)胞是巨噬細(xì)胞，就是M0，未分化的巨噬細(xì)胞，外觀是圓形高折光，貼壁非常快，10min內(nèi)能貼80%，也容易脫落，無胰酶拍打200下或者胰酶室溫30s輕輕拍打都能下來60~80%，不過無胰酶吹打是吹不下來的。

如果培養(yǎng)條件不好，它會分化，變成多邊形，從高折光的小圓亮點變成灰色的一小片，變得粘附非常緊，所以我覺得應(yīng)該控制消化時間和拍打力度，不要過分追求把所有細(xì)胞都弄下來，這樣一來影響狀態(tài)好的未分化圓形細(xì)胞活力，另一方面會把狀態(tài)不好的分化細(xì)胞弄下來，不如縮短胰酶時間到1min內(nèi)，把分化過的高粘附細(xì)胞留在瓶里，正好起到對細(xì)胞分化狀態(tài)的選擇作用。

我們進行傳代時首先無胰酶拍打，能弄下來約50%的細(xì)胞，然后加胰酶拍打30s，鏡下觀察，一般30s剛剛好，剩下未脫落的都是分化的形態(tài)不好的細(xì)胞，這種細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)，如果要回到圓形，可以用胰酶消化后傳代。