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我們在CHO懸浮細(xì)胞的發(fā)酵生產(chǎn)，需要做細(xì)胞株的傳代穩(wěn)定性，那么我們在細(xì)胞一般都會出現(xiàn)幾個疑問，今天富道細(xì)胞來跟大家大概解答一下細(xì)胞搖瓶在CHO懸浮細(xì)胞的發(fā)酵生產(chǎn)的應(yīng)用。

1. 傳代穩(wěn)定性實驗一般要傳多少代合適呢？

要根據(jù)以后的生產(chǎn)周期來決定的。譬如從復(fù)蘇細(xì)胞開始到完成一批生產(chǎn)的時間是多少，穩(wěn)定性至少要大于這個時間吧。為了生產(chǎn)項目的可靠性建議做生產(chǎn)周期的兩倍穩(wěn)定性時間，這樣可以看出細(xì)胞株表達(dá)量的一個變化趨勢。細(xì)胞株會隨著傳代的時間變化呈一個下降趨勢的。

2. 檢測目的蛋白的表達(dá)穩(wěn)定性，每一代細(xì)胞應(yīng)培養(yǎng)多長時間取樣呢？是不是每代細(xì)胞都要補料培養(yǎng)半個月再測？

每一代都做沒有這個必要，做幾條能夠看到表達(dá)量穩(wěn)定的趨勢就行了（但也不能做兩三條這樣沒法看到趨勢的）。

3. 檢測細(xì)胞遺傳穩(wěn)定性，需要提DNA那每一代細(xì)胞培養(yǎng)多長時間取樣呢？

這個可以和第二點補料培養(yǎng)同周期做。

4. 有木有詳細(xì)點的傳代穩(wěn)定性實驗的protocl可以參考??？

穩(wěn)定性主要關(guān)注細(xì)胞株表達(dá)量是否穩(wěn)定，蛋白活性是否是穩(wěn)定的及細(xì)胞遺傳穩(wěn)定。這些都是為了說明你以后生產(chǎn)時穩(wěn)定的。

5.如果用搖瓶做的話，那細(xì)胞都不用建庫了，直接接種到搖瓶里開始fedbatch培養(yǎng)了？

即使用搖瓶也是要建庫的，穩(wěn)定性評估的是MCB和WCB庫，不是單純的評估細(xì)胞株的。