細(xì)胞培養(yǎng)瓶多用來(lái)培養(yǎng)貼壁細(xì)胞,這類細(xì)胞貼附在瓶子底部生長(zhǎng),當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)到一定程度后,需要將細(xì)胞消化下來(lái)再進(jìn)行后續(xù)操作。那我們?cè)撊绾蜗?a href="http://rcdzsw.cn/pyfp.html" target="_blank">細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的細(xì)胞呢?
由于貼壁細(xì)胞的生長(zhǎng)特性,為了維持細(xì)胞良好的狀態(tài),我們需要借助特殊的溶液進(jìn)行細(xì)胞消化,也就是胰酶。多數(shù)細(xì)胞消化的時(shí)候只要用胰酶潤(rùn)洗一遍即可,吸去胰酶后,殘留的那些無(wú)法計(jì)算體積的附著在細(xì)胞表面的微量胰酶在37℃一般不到2min足夠消化細(xì)胞(絕大部分1min不到)。
對(duì)于這些細(xì)胞原則上不要用胰酶孵育細(xì)胞,連續(xù)這樣傳代,對(duì)細(xì)胞傷害很大。簡(jiǎn)單的程序是PBS潤(rùn)洗吸去,胰酶潤(rùn)洗吸去,然后37℃消化。比較難消化的細(xì)胞(潤(rùn)洗方法5min還不能消化),這樣的細(xì)胞一般需要用少量胰酶孵育。
需要注意,不是細(xì)胞全部成間隔分布很離散的單個(gè)圓形才算消化好了,一般我們?nèi)庋塾^察貼壁細(xì)胞層,只要能移動(dòng)了,多半呈沙壯移動(dòng),其實(shí)已經(jīng)可以了,很多人喜歡把細(xì)胞消化或者吹打成完全分離細(xì)胞,這是沒(méi)有必要的。一般能移動(dòng)了,說(shuō)明細(xì)胞與細(xì)胞培養(yǎng)瓶材料的附著已經(jīng)消失了,細(xì)胞之間的附著也已經(jīng)消失了,細(xì)胞已經(jīng)獨(dú)立分布了,這個(gè)時(shí)候應(yīng)該停止消化。
細(xì)胞消化的效果直接影響后續(xù)的細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn),在消化細(xì)胞的時(shí)候我們要注意無(wú)菌操作,避免將外源污染引入細(xì)胞培養(yǎng)瓶,影響后續(xù)細(xì)胞生長(zhǎng)。