傳代培養(yǎng)是指需要將培養(yǎng)物分割成小的部分,重新接種到另外的培養(yǎng)器皿(瓶)內(nèi),再進行培養(yǎng)的過程。在懸浮細胞傳代中,細胞搖瓶是不可或缺的一種細胞培養(yǎng)耗材。
細胞生長不依賴支持物表面,在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)生長,這類細胞稱為懸浮細胞,如淋巴細胞。懸浮細胞傳代步驟如下:
1.先將裝有細胞的細胞搖瓶從培養(yǎng)箱拿出,用酒精噴灑瓶身后將細胞搖瓶拿進超凈臺;
2. 打開瓶蓋,用200 ul移液器取100~200 ul細胞放入1.5 mlEP管中,瓶蓋過火,擰緊,將培養(yǎng)瓶放回搖床;
3.將200 ul細胞混勻,取10 ul細胞加入10 ul臺盼藍,顯微鏡下計數(shù)。根據(jù)細胞數(shù)決定下游實驗;
4.細胞需計數(shù)兩次求平均值;
5.懸浮細胞生長參數(shù);
6.根據(jù)不同細胞的生長曲線在合適的時間和密度給細胞接種傳代。
以上是細胞搖瓶在懸浮細胞傳代中的應用,這種耗材不止應用于懸浮細胞的培養(yǎng),在液體菌種制備中同樣具備廣泛的應用,如雞腿菇、枯草芽孢桿菌、皺柄白馬鞍菌等,是一種經(jīng)濟實惠的細胞培養(yǎng)工具。
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