細胞搖瓶是一種三角形的細胞培養(yǎng)容器,多用于培養(yǎng)各種懸浮細胞或儲存、制備培養(yǎng)基。在細胞生長到一定程度后,我們需要對其進行傳代操作,那么,具體該如何操作呢?
由于細胞已經(jīng)在生長培養(yǎng)基中懸浮,所以無需酶的作用使其從培養(yǎng)容器表面脫離,方法簡單。首先準(zhǔn)備裝有懸浮細胞的三角搖瓶;將完全生長培養(yǎng)基預(yù)熱至37℃;37℃ 培養(yǎng)箱充有二氧化碳濃度為 5% 的濕化空氣。懸浮細胞傳代有兩種方式:
一、直接傳代法
1、待懸浮細胞長滿至 80%~90%(細胞懸液變黃),即可傳代;
2、用吸管吸棄細胞懸液 1 / 2~1 / 3;
3、加入適量的新鮮培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)。
二、離心傳代法(在發(fā)現(xiàn)有細胞碎片的情況下)
1、將細胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi);
2、150 g 離心 5 min,棄去上層清液;
3、使用新鮮的培養(yǎng)基重懸細胞;
4、吸管吸取適量細胞懸液,裝入新的細胞搖瓶,再加入適量的新鮮培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)。
以上是細胞搖瓶中懸浮細胞的傳代操作,在操作的時候我們要嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作,避免引入外源污染,影響細胞生長。
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