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細(xì)胞凍存為了減少我們?cè)诩?xì)胞培養(yǎng)時(shí)的細(xì)胞代謝頻率，從而進(jìn)行長(zhǎng)期儲(chǔ)存的一種細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，是細(xì)胞保存的主要方法之一，起到了細(xì)胞保種的作用。那么，細(xì)胞凍存的需要用到哪些細(xì)胞培養(yǎng)耗材，其凍存步驟又是怎樣的呢？利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來，這樣在需要的時(shí)候再復(fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞凍存需要用到的細(xì)胞培養(yǎng)耗材包括凍存管、細(xì)胞培養(yǎng)瓶、吸管、移液管等。凍存步驟如下：

1. 待凍存細(xì)胞懸液的制備

（1）按常規(guī)方法消化處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞培養(yǎng)物，制備單細(xì)胞懸液，并計(jì)算細(xì)胞總數(shù)；

（2）將細(xì)胞懸液以800～1000r/min離心5min，去上清夜；

（3）向細(xì)胞沉淀物中加入冷凍保護(hù)液，輕輕吹打混勻，使細(xì)胞密度達(dá)1×106～1×107個(gè)/ml；

（4）按每管1～1.5ml的量分裝于凍存管內(nèi)，擰緊管蓋；

（5）最后將凍存管上做好標(biāo)記，包括細(xì)胞代號(hào)及凍存日期。

2. 分級(jí)冷凍

（1）首先將凍存管放入普通冰箱冷藏室（4～80C），放置時(shí)間在半小時(shí)到一小時(shí)左右；

（2）后續(xù)將凍存管置于普通冰箱冷凍室（-100C～-200C），此次時(shí)間在半小時(shí)到一個(gè)小時(shí)左右；

（3）之后將凍存管轉(zhuǎn)入低溫冰箱（-300C），凍存時(shí)間維持在半小時(shí)左右；

（4）然后將凍存管轉(zhuǎn)移到超低溫冰箱（-700C～-800C），放置一夜；

（5）最后將凍存管投入液氮保存。

3. 記錄

做好凍存記錄。記錄內(nèi)容包括凍存日期、細(xì)胞代號(hào)、凍存管數(shù)、凍存過程中降溫的情況、凍存位置以及操作人員，此時(shí)可以選用富道細(xì)胞的SBS三碼合一凍存管，記錄更加簡(jiǎn)單。