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我們在使用凍存管進(jìn)行凍存細(xì)胞時(shí)不能直接在不加任何條件下凍存細(xì)胞，因?yàn)椴还苁羌?xì)胞還是環(huán)境中的水分都會(huì)形成冰晶從而影響細(xì)胞死亡，所以需要加入保護(hù)液，使冰點(diǎn)降低，在后續(xù)凍結(jié)的過程中能有效的保護(hù)細(xì)胞因?yàn)楸У漠a(chǎn)生而造成死亡。明白了使用凍存管凍存細(xì)胞的大概方法之后，接下來跟大家詳細(xì)說明一下：

1、消化細(xì)胞，將細(xì)胞懸液收集至離心管中。

2、1000rpm離心10分鐘，棄上清液。

3、沉淀加含保護(hù)液的培養(yǎng)，計(jì)數(shù)，調(diào)整至5×106/ml左右。

4、將懸液分至凍存管中，每管1ml。

5、將凍存管口封嚴(yán)。如用安瓿瓶則火焰封口，封口一定要嚴(yán)，否則復(fù)蘇時(shí)易出現(xiàn)爆裂。

6、貼上標(biāo)簽，寫明細(xì)胞種類，凍存日期。凍存管外拴一金屬重物和一細(xì)繩。

7、按下列順序降溫：室溫→4℃（20分鐘）→冰箱冷凍室（30分鐘）→低溫冰箱（－30℃ 1小時(shí)）→氣態(tài)氮（30分鐘）→液氮。

注意：操作時(shí)應(yīng)小心，以免液氮凍傷。液氮定期檢查，隨時(shí)補(bǔ)充，絕對(duì)不能揮發(fā)干凈，一般30立升的液氮能用1～1.5月。