在培養(yǎng)細(xì)胞的時(shí)候我們經(jīng)常會(huì)遇到這樣或那樣的問題,如細(xì)胞不貼壁、細(xì)胞污染甚至死亡等,其中,細(xì)胞培養(yǎng)瓶中出現(xiàn)沉淀也是常見的一類問題。如果出現(xiàn)沉淀,有可能是濃度變化或鈣鹽引起。
濃度:在培養(yǎng)細(xì)胞的時(shí)候,培養(yǎng)基是必備的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),如果培養(yǎng)基蒸發(fā),其中的組分(包括鹽)的濃度將會(huì)增加,特別是培養(yǎng)基表面可能容易形成晶體沉淀。避免濃度變化,我們首先要確保細(xì)胞培養(yǎng)瓶不經(jīng)歷蒸發(fā),時(shí)刻檢測(cè)孵育箱的駕駛效果,避免脫水。
鈣鹽:制備無血清培養(yǎng)基時(shí),組分添加的順序可能導(dǎo)致不可溶分子的形成。鈣鹽尤其容易沉淀,比如CaCl2和MgSO4在溶液中反應(yīng)產(chǎn)生CaSO4晶體。高壓滅菌和pH值不穩(wěn)定會(huì)加劇這一問題。避免這種情況的發(fā)生,我們可以在逐個(gè)添加其它培養(yǎng)基組分之前,用去水離子水單獨(dú)溶解CaCl2;或者可以添加緩沖液避免滲透壓的變化。
當(dāng)然,濃度變化或者鈣鹽只是細(xì)胞培養(yǎng)瓶中出現(xiàn)沉淀的兩方面原因,也有可能是其他原因?qū)е拢鐪囟劝l(fā)生極端變化或者金屬補(bǔ)充物等。了解引起沉淀的原因后,我們就可以從操作上降低沉淀的出現(xiàn),確保實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。