如果說有一件事的費心程度堪比養(yǎng)娃,那一定是培養(yǎng)細胞。細胞不貼壁、細胞污染、細胞死亡……過程中需要面臨各種突發(fā)狀況,其中細胞培養(yǎng)瓶中出現(xiàn)沉淀也是常見的一種情況,原因可能與金屬補充物有關(guān)。
銅、鐵和鋅等金屬離子是細胞生長所必需的,是無血清培養(yǎng)基的重要補充物。培養(yǎng)系統(tǒng)中其他血清組分的缺失可能導(dǎo)致這些金屬沉淀,為細胞形成有毒的環(huán)境。在較高pH環(huán)境下(一般>8時),碳酸鹽和氫氧根離子與銅離子、磷酸鹽和氫氧根離子與鐵離子、碳酸鹽、磷酸鹽和氫氧根離子與鋅離子、氫氧根離子與鎂離子易形成不溶性沉淀物;在氧化條件下,銅和鋅更易于沉淀,也就是我們在細胞培養(yǎng)瓶中看到的沉淀。
那么我們?nèi)绾伪苊庖驗榻饘傺a充物產(chǎn)生的沉淀呢,可以通過加入鐵結(jié)合蛋白轉(zhuǎn)帖蛋白,也可添加緩沖液避免滲透壓的變化,還可以向培養(yǎng)基中補充甘露醇或丙酮酸以結(jié)合過氧化氫,盡可能降低氧化應(yīng)激。
總之,細胞培養(yǎng)瓶中出現(xiàn)沉淀不要慌,具體分析找出原因,制定相應(yīng)的措施就可以大大降低沉淀的出現(xiàn),確保細胞的良好生長。