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HEK 293T細(xì)胞是我們?cè)S多科研小伙伴的入門細(xì)胞，也常被稱作“工具細(xì)胞”，實(shí)驗(yàn)中常使用它來進(jìn)行，慢病毒包裝生產(chǎn)及滴度測(cè)定，細(xì)胞轉(zhuǎn)染，條件培養(yǎng)基制作，蛋白表達(dá)驗(yàn)證等試驗(yàn)。而我們細(xì)胞工廠適用于工業(yè)批量生產(chǎn)、實(shí)驗(yàn)室操作和大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)的常規(guī)耗材之一。

首先先跟大家說一下細(xì)胞轉(zhuǎn)染的目的和原理

粗略理解為使用陽(yáng)離子聚合物+質(zhì)粒構(gòu)成的復(fù)合物轉(zhuǎn)入細(xì)胞內(nèi)，讓你轉(zhuǎn)入的質(zhì)粒瞬時(shí)表達(dá)，產(chǎn)生一個(gè)短暫（約持續(xù)96h）的效應(yīng)，用于短期實(shí)驗(yàn)。

陽(yáng)離子聚合物能夠和帶負(fù)電的質(zhì)粒形成復(fù)合物，復(fù)合物穿膜（或是膜融合或是內(nèi)吞）被細(xì)胞“吃掉”，從而將你的目的質(zhì)粒帶入細(xì)胞內(nèi)。大約在轉(zhuǎn)染完成后的48h，可以對(duì)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率和蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。

檢測(cè)時(shí)，轉(zhuǎn)染效率=檢測(cè)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)/檢測(cè)時(shí)總細(xì)胞數(shù)*100%，一般使用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。

細(xì)胞工廠在HEK 293T轉(zhuǎn)染條件和過程：

以PEI用作轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染為例，配制濃度為1μg/μL的PEI（配制方法網(wǎng)上搜索一下很好查），準(zhǔn)備你的待轉(zhuǎn)質(zhì)粒（假設(shè)濃度為也為1μg/μL=1000ng/μL）。

PEI轉(zhuǎn)染時(shí)的原則為，質(zhì)量比，PEI:質(zhì)粒=3:1；轉(zhuǎn)染時(shí)需要使用無血清無雙抗的培養(yǎng)基將PEI和質(zhì)粒分別做成稀釋液（一般稱為A液和B液），再混合在一起方便兩者聚合。以10cmdish的轉(zhuǎn)染為例，10cm dish一般轉(zhuǎn)染10μg的質(zhì)粒,那么我們需要30μg的PEI。

A液：10μL質(zhì)?！?00μL無抗無血清DMEM，混勻

B液：30μLPEI→500μL無抗無血清DMEM，混勻

B液逐滴加入A液中，渦旋1min，或槍頭吹打約80次，室溫孵育15-20min，不需要再次混勻直接填加到鋪好的10cm dish中。

轉(zhuǎn)染后18h，將培養(yǎng)液更換成新鮮的DMEM完全培養(yǎng)基；轉(zhuǎn)染24-96h后檢測(cè)。

這就是細(xì)胞工廠在HEK 293T轉(zhuǎn)染的的應(yīng)用了。如果有什么問題歡迎各位前來咨詢