首先我們需要明確一點(diǎn),細(xì)胞工廠中如果出現(xiàn)抱團(tuán)情況不一定代表生長(zhǎng)不好。如果輪廓清晰,可以清楚地看到一個(gè)個(gè)細(xì)胞,說明細(xì)胞正在分裂。然而,大部分細(xì)胞抱團(tuán)都表示細(xì)胞的生長(zhǎng)出現(xiàn)了問題,其原因可能來自以下幾個(gè)環(huán)節(jié):
細(xì)胞消化:細(xì)胞是非常脆弱的,如果消化時(shí)吹打太用力、消化液太強(qiáng)或有毒性等容易導(dǎo)致細(xì)胞死亡,進(jìn)而釋放DNA,形成黏性的細(xì)胞團(tuán)。細(xì)胞消化不完全,細(xì)胞間的連接沒有分開;細(xì)胞消化過度,圓形的細(xì)胞容易聚堆,再分開很困難。
操作建議:消化細(xì)胞的過程要輕柔,切忌用力拍打培養(yǎng)瓶的側(cè)壁;對(duì)于貼壁較牢的細(xì)胞,建議分批多次消化,降低胰酶對(duì)細(xì)胞的損傷。培養(yǎng)前充分了解細(xì)胞的特性,確定細(xì)胞的最佳消化時(shí)間。
細(xì)胞傳代:細(xì)胞傳代時(shí)吹打不均勻,沒有將細(xì)胞團(tuán)吹散;細(xì)胞離心速度過大或者離心時(shí)間過長(zhǎng);傳代時(shí)間把控不當(dāng),細(xì)胞長(zhǎng)的太滿才進(jìn)行傳代操作。
操作建議:消化前加入適量緩沖液對(duì)細(xì)胞進(jìn)行清洗,清除死亡的細(xì)胞團(tuán)和部分堆疊雜質(zhì);確定細(xì)胞正確的離心條件,嚴(yán)格按條件執(zhí)行;根據(jù)不同細(xì)胞的生長(zhǎng)周期,在細(xì)胞匯合度達(dá)到80%~90%就可以進(jìn)行傳代。
細(xì)胞接種:細(xì)胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶時(shí)分布不均勻,或者細(xì)胞接種密度過高。
操作建議:細(xì)胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶后要進(jìn)行搖勻操作,放置的時(shí)候注意平衡。接種細(xì)胞前計(jì)數(shù),按照合適的密度進(jìn)行接種。
細(xì)胞狀態(tài)不好:如果細(xì)胞本身的狀態(tài)不好,或者已經(jīng)發(fā)生老化,也容易造成細(xì)胞抱團(tuán)生長(zhǎng)。
操作建議:注意觀察細(xì)胞狀態(tài),及時(shí)換液或者傳代。