細胞空泡化是指變性細胞的胞質(zhì)、胞核內(nèi)出現(xiàn)大小不一的空泡(水泡),細胞呈蜂窩狀或網(wǎng)狀的現(xiàn)象。變性嚴重者,小水泡相互融合成大水泡,細胞核懸于中央,或被擠于一側(cè),細胞形體顯著腫大,胞質(zhì)空白,外形如氣球狀。
細胞空泡化通常伴隨著細胞死亡和細胞功能狀態(tài)的改變,許多自然或者人工合成的化合物以及被細菌或者病毒感染后均會出現(xiàn)不可逆的胞質(zhì)空泡化,因此出現(xiàn)這種情況,細胞便不可再用于后續(xù)的實驗中。
細胞工廠出現(xiàn)空泡化的原因及解決辦法
細胞老化:原代細胞培養(yǎng)的過程中經(jīng)常出現(xiàn)這樣的情況,這是因為有些細胞傳代次數(shù)過多,處于終末分化狀態(tài),不會再分裂,時間長了就會空泡化而死亡。
正確做法:原代細胞使用較低代次進行實驗,傳代細胞避免傳代次數(shù)過高。
pH變化:由于培養(yǎng)液配制錯誤、儲存不當、血清質(zhì)量不合格等原因,引起的滲透壓與pH值發(fā)生改變。
正確做法:更換新鮮培養(yǎng)液調(diào)整到合適的pH值,再進行培養(yǎng)。
操作不當:胰酶消化時間過長導致細胞狀態(tài)受損,以及吹打時力氣過大產(chǎn)生的大量氣泡長期存在于培養(yǎng)液中也會導致細胞的空泡化。
正確做法:選用合適的胰酶濃度,控制好消化時間。操作時避免吹打太過用力,如果出現(xiàn)了大量氣泡,可將氣泡去除后再培養(yǎng)。
細胞自噬:細胞缺乏營養(yǎng)導致饑餓誘導形成自噬也會形成空泡化,但是這種空泡在光學顯微鏡下是看不到的,只有在電鏡下才能觀察到。
正確做法:要保證細胞培養(yǎng)所需的營養(yǎng)充足,可以通過增加血清濃度和在培養(yǎng)基中加入谷氨酰氨解決。
細胞污染:一些細胞出現(xiàn)空泡化,如果繼續(xù)培養(yǎng),空泡范圍會擴大,即使傳代后也如此,出現(xiàn)這種情況,細胞基本無法挽救。后來檢測發(fā)現(xiàn),此種細胞存在支/衣原體的感染。
正確做法:嚴格執(zhí)行無菌操作,操作時要規(guī)范,減少污染的可能性。
這就是在細胞工廠培養(yǎng)過程中細胞空泡化及解決辦法。